在MDA-MB-231細胞中，進一步分析COS作用時問對細胞生存率的制备肿瘤影響。由圖7所示，壳寡與初始狀態下的糖及細胞生存率相比(見圖7(a))，COS短時間作用後細胞生存率顯著降低，其抗表現出增強細胞對DOX敏感性的活性能力。其中，酶法給藥時間4h條件下(見圖7(b))，制备肿瘤COS質量濃度在0～125ug/mL時細胞生存率呈質量濃度依賴性下降，壳寡250～1000μg/mL時趨於平穩，糖及與陽性藥物DOX組相比均有極大的其抗顯著性差異(***P＜O.001)：作用8h(見圖7(c))，COS質量濃度在0～125μg/mL時細胞生存率約下降20％，活性與DOX組相比有較大顯著性差異(**P＜0.01)，酶法增大質量濃度在250～1000μg/mL時有顯著性差異(*P＜0.05)。制备肿瘤繼續延長時問至12h並不能降低細胞的壳寡生存率(見圖7(d))。COS在MDA-MB-231細胞中增強其對阿黴素敏感性的機製有待進一步分析。
考慮到MDA-MB-231細胞的高遷移特性，首先以小室遷移實驗體外考察COS能否抑製腫瘤細胞擴散。如圖8所示，500μg/mLCOS作用後，相較於空白對照組(NC)，COS組的細胞遷移數量明顯減少(**P＜0.01)。說明COS可有效抑製MDA-MB-231細胞遷移，這與Nam等報道的研究現象一致。此外，COS抑製腫瘤細胞遷移的現象也存在於成纖維HTl080細胞和MCF-10A乳腺上皮細胞。由此確認了COS抑製腫瘤細胞遷移的作用。
DOX作用於腫瘤細胞時，作為拓撲異構酶Ⅱ抑製劑，進入細胞核幹擾DNA複製而發揮作用。借助DOX自帶紅色熒光的特點，通過激光共聚焦顯微鏡觀察複合COS給藥時，MDA-MB-231細胞對DOX的攝取效果，結果如圖9所示。隨著DOX作用時問的延長，無論是否給藥COS，細胞內DOX熒光強度均呈時間依賴性增強。進一步與複合給藥相比，1h時，兩組都觀察到輕微的DOX入核量，且差異不明顯。而在3h時，COS與DOX複合給藥組較DOX單獨給藥組顯示出更強的核內紅色熒光。5h時，兩組的細胞核內紅色熒光均達到最強但元顯著差異。由此說明，COS具有促進DOX快速富集於MDA-MB-231細胞核的作用。推測這一過程可能與COS帶正電荷有關，由於靜電作用靶向改變了腫瘤細胞膜表麵負向電子流，從而影響信號傳導通路。此外，COS的這種增強DOX誘導細胞凋亡的作用也在負載DOX的含COS納米材料中被發現和報道。
總結以上結果可以推測，在MDA-MB-231細胞中，COS與DOX的複合給藥通過抑製腫瘤細胞遷移，並促進陽性藥物DOX的入核而發揮抗腫瘤活性。二者的聯用具有一定協同增效作用。
COS具有良好的生物相容性和廣泛的生物學活性。COS的抗腫瘤作用是研究的熱點，但其作用與機製因糖的組成以及細胞種類等而各異，有必要進一步在特定細胞上探討COS的作用與機製。
步在特定細胞上探討COS的作用與機製。基於前期在細胞水平發現的糖與化療藥物聯用提高藥效的研究結果，本研究中在酶法製備得到聚合度2～4的低相對分子質量COS的基礎上，采用COS與DOX複合給藥的方式評價COS的抗腫瘤作用。體外抗腫瘤活性評價結果顯示，單獨給藥低質量濃度COS對所選用的3株腫瘤細胞並無顯著抑製效果：當與DOX複合給藥時，低質量濃度COS即可顯著降低人乳腺癌MDA-MB-231細胞生存率。進一步的機製分析推測了COS可通過抑製人乳腺癌細胞遷移，同時促進DOX入核而增強腫瘤細胞對化療藥的敏感性，發揮協同抗腫瘤特性。這為功能糖等膳食補充劑與化療藥物聯用的治療方案提供了數據參考和理論支撐。
由於COS的抗腫瘤作用與機製較為複雜，受糖本身性質以及細胞株影響較大，未來對於COS抗腫瘤作用的深入解析還有待從特定糖的結構、糖與細胞作用的靶點、可能影響的關鍵基因和信號通路等分子水平進一步闡釋和驗證。
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