方法：采用高效液相色譜法-股票行證券管理

方法：采用高效液相色譜法

时间：2025-05-06 03:48:08来源：

目的盐炙由基：分析鹽炙對廣西餘甘子中黃酮類成分清除DPPH自由基（1,1-二苯基-2-苦肼基）譜效關係的影響。方法：采用高效液相色譜法，对广的影建立13批廣西不同產地餘甘子鹽炙前後黃酮類成分的西余响HPLC指紋圖譜，結合DPPH自由基體外抗氧化實驗，甘中关系用改進的黄酮灰色關聯分析法分析整體的指紋圖譜與藥效之間的關聯。結果：確定了20個特征共有峰，类成清除DPPH自由基作用是分清這20個特征共有峰所代表的化學成分組成的化學成分群共同作用的結果，鹽炙後清除DPPH自由基作用增強。谱效結論：鹽炙後廣西餘甘子黃酮類成分的盐炙由基HPLC指紋圖譜與清除DPPH自由基作用增強具有相關性，為其鹽炙品質量控製和評價提供參考。对广的影

餘甘子為大戟科植物餘甘子Phyllanthus emblica L.的西余响幹燥成熟果實，又名牛甘子、甘中关系喉甘子、黄酮魚木果等，类成廣西是分清其原植物主要分布區之一。其具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳等功效。餘甘子主要含酚酸類、黃酮類化合物，現代藥理研究顯示餘甘子中黃酮類化合物具有抗氧化、抑製肝癌細胞增殖、調節免疫功能、抗炎等作用。指紋圖譜作為綜合性可量化的現代分析手段，充分的展現提取物質的獨特信息。本文在前期研究的基礎上，以廣西餘甘子的生品和鹽炙品為研究對象，建立13批廣西不同產地餘甘子鹽炙前後黃酮類成分的HPLC指紋圖譜，結合DPPH自由基體外抗氧化實驗，用改進的灰色關聯分析法分析整體的指紋圖譜與藥效之間的關聯，建立譜效關係，為進一步分析廣西餘甘子鹽炙後黃酮類成分的抗氧化藥效物質基礎提供實驗依據，為其鹽炙品質量控製和評價提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 Infinity Ⅱ液相色譜儀（美國Agilent公司），Water SunFire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，XS205DU型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司），GZX-GF-Ⅱ型電熱恒溫鼓風幹燥箱（上海躍進醫療器械有限公司），DTA-42型超聲波清洗機，DK-98-Ⅱ型電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司），EV311型旋轉蒸發儀（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）。

1.2 試藥

30~60目聚酰胺（國藥集團化學試劑有限公司，批號20150413）；蘆丁對照品（中國藥品生物製品檢定所，批號100080-200306，供HPLC法測定純度91.7%）；食用鹽（孝感廣鹽華源製鹽有限公司，批號20160721C，經測定，按氯化鈉計，氯化鈉含量99.61%）；乙腈、甲醇和磷酸均為色譜純；實驗用水為超純水。所有樣品經挑選為飽滿、質實、無發黴、無蟲害者，並經廣西中醫藥大學郭敏副教授鑒定均為大戟科植物餘甘子Phyllanthus emblica L.的成熟果實。將挑選後的樣品用超純水洗淨，幹燥，去核，粉碎製成直徑為0.5~0.8 cm的粗顆粒，充分混合均勻，再按四分法取樣，每份約200 g，備用。藥材詳情見表1。

2 方法與結果

2.1 樣品炮製

2.1.1 生品

取餘甘子粗顆粒100 g，粉碎，過4號篩，混合均勻，備用。

2.1.2 鹽炙品

取餘甘子粗顆粒約100 g，按前期優選工藝鹽炙，加入鹽水200 mL（含5 g食用鹽），拌勻並吸盡，悶透12 h後，攤薄在瓷盤上，立即放入105 ℃烘箱中，烘幹（溫度偏差＋0.5℃）時取出，放涼，粉碎，過4號篩，混合均勻，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0~10 min，5%~10%A；10~20 min，10%~13%A；20~25 min，13%~14%A；25~35 min，14%~15%A；35~55 min，15%~20%A；55~56 min，20%~40%A；56~70 min，40%A），流速：1 mL·min-1，柱溫：30 ℃，進樣量：10 μL，檢測波長：254 nm。

2.3 對照品儲備液的製備

取蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇配成蘆丁1.860 7 mg·mL-1的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的製備

分別取“2.1.1”項下生品和“2.1.2”項下鹽炙品約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，在文獻報道的基礎上，加入60%乙醇溶液190 mL，加熱回流5.5小時，放冷，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，並轉移至25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得質量濃度為0.08 g·mL-1的樣品提取液。取浸泡好的聚酰胺樹脂，濕法裝柱（內徑為1.2 cm，柱高為15 cm），用水洗至無醇味，精密量取上述樣品提取液20 mL，用水60 mL洗脫，棄去洗脫液，再用50%乙醇溶液70 mL（0.5 mL·min-1）洗脫，收集洗脫液，水浴蒸幹，殘渣加甲醇溶解，轉移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關係

分別精密吸取“2.3”項下的對照品儲備液0.15、0.3、0.6、1.2、2.5、4.8 mL置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按“2.2”項下色譜條件進樣測定。以濃度為橫坐標（X），峰麵積為縱坐標（Y），得回歸方程：Y=19.9215X-101.9104（r=0.9999），線性範圍為0.0558~1.7863 mg·mL-1。