本實驗中發酵液細胞分離後，加入50%的菌胞究三氯乙酸溶液1/5體積，在16000×g的外多離心力下分別離心10min、20min、糖提30min、取纯40min，化工選取最優化離心時間，艺研如圖4所示。乳酸乳球離心的菌胞究時間選取30～40min為最佳。
本實驗中發酵液細胞分離後，加入50%的取纯三氯乙酸溶液1/5體積，在16000×g的化工離心力下分別離心40min，加入3倍體積濃度分別為70%、艺研80%、乳酸乳球95%、100%的乙醇溶液，4℃條件下醇沉12h。透析，測定胞外多糖的產量，如圖5所示。多糖的提取量隨著乙醇濃度的增加而不斷增大。一些小分子的多糖分子在低濃度的乙醇下不易沉澱，隻有當乙醇濃度足夠高時，才發生沉澱。因此當乙醇濃度為100%時，達到最大值，即乙醇沉澱多糖的最優濃度為100%。
蛋白沉澱後分別按照1∶1、1∶2、1∶3、1∶4的料醇比加入濃度為100%的乙醇溶液，測定胞外多糖的產量，如圖6所示。增加乙醇添加體積可以提高胞外多糖的獲得量，沉澱中多糖提取率隨乙醇添加倍數的增加而升高，但是當乙醇添加倍數在3～4倍時，EPS含量明顯提高，且都達到較高濃度，所以從提取成本考慮，最佳的乙醇添加倍數為3倍。
乙醇沉澱多糖中在4℃條件下分別醇沉12h、24h、36h，測定胞外多糖的產量，如圖7所示。醇沉時間與胞外多糖含量的關係不明顯。而實驗過程中，加入乙醇後立即產生沉澱，並且隨著醇沉時間的增加，沉澱物顏色不斷加深。為了保證粗多糖的純度，醇沉時間選12h最宜。
分別選取影響EPS含量較大的提取條件，三氯乙酸濃度、離心力和離心時間進行三因素三水平正交實驗，結果如表1。結果表明，影響EPS含量的各因素主次關係為B＞C＞A，離心力對多糖提取的影響較大，離心時間次之，三氯乙酸濃度對多糖提取的影響最小。根據正交實驗結果，得出最優發酵條件組合為A3B2C3，即60%的三氯乙酸濃度、在14000×g的離心力下離心40min。研究表明，離心力和離心時間的增加可以提高蛋白的脫離率，但會減少最終EPS含量，降低多糖提純得率，因此，在14000×g離心力下離心40min最佳，EPS含量可達到392.50mg/L。
本項目以篩選出的胞外多糖高產菌乳酸乳球菌乳亞種LL9為菌種，進行EPS提取純化工藝條件研究。使用三氯乙酸法沉澱蛋白質，通過適當控製三氯乙酸的用量來降低對EPS結構的破壞。通過單因素實驗及正交實驗最終驗證，發現當用濃度為60%三氯乙酸處理過發酵液後，在14000×g離心力下離心40min除蛋白效果最佳；沉澱多糖的最優組合是3倍體積、濃度為100%的乙醇沉澱12h。最優化分離純化工藝條件為：添加三氯乙酸60%（w/v）（12h）→500r/min攪拌5min→離心沉澱除蛋白（4℃，14000×g，40min）→上清加乙醇沉澱多糖（100%，3倍體積，4℃，處理12h）→離心（12000×g，30min）→冷凍幹燥→沉澱溫水溶解（稀釋10倍）→透析MD34（4℃，處理12h）。經實驗驗證工藝流程合理並可行。EPS含量最後達到392.50mg/L，產量為原來的1.49倍。為今後進一步純化和深入研究乳酸菌產胞外多糖的結構和生物活性等提供參考。
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